Sprouty 2 蛋白在多种肿瘤组织中表达较低，是一种重要的抑癌蛋白。Sprouty 2 蛋白表达水平的高低在某种程度上影响着肿瘤的发生，而且该蛋白表达量直接关系着患者的预后[1]。本实验通过检测Sprouty 2 蛋白在人乳腺癌MCF-7细胞上的表达情况，研究其在乳腺癌的发病机制中的生物学功能，现将结果总结报告如下：

　　1材料与方法

　　1.1细胞培养与传代

　　选用含10%新生小牛血清的无酚红1640培养基培养人乳腺癌MCF-7细胞株（本实验室保存），用0.125%的胰酶进行消化，终止消化后用吸管吹打，制成细胞悬液，1500rpm离心5min，弃去上清按1*105/mL的浓度传代。

　　1.2 流式细胞免疫荧光法计数Sprouty2蛋白表达细胞数和荧光强度

　　MCF-7细胞以104/ml的浓度接种于两个100ml的培养瓶中，次日查看生长状况良好后以无血清培养基轻柔冲洗2次再加入无血清培养基，继续培养1d。运用DPBS冲洗2次前日培养的MCF-7细胞后，通过0.04%EDTA消化使细胞脱壁。洗涤液清洗2次，调整细胞浓度为5*106-1*107/mL。在装有Sprouty2蛋白特异性抗体的离心管中加入50ul细胞悬液，使抗体终浓度为1：400，4℃孵育30min，洗涤液洗2次，离心后弃去上清，加入50ul1：100的羊抗兔IgG混匀，4℃避光孵育30min。最后再次用洗涤液洗涤2次后，加入1mlDPBS悬浮细胞沉淀，再用流式细胞仪检测悬浮MCF-7细胞中荧光标记的Sprouty2阳性细胞数和荧光强度。阴性对照以DPBS代替特异性一抗，其余操作流程相同，同样检测MCF-7细胞中Sprouty2的表达情况。

　　1.3统计学处理

　　对文中所得数据进行统计学处理，采用SPSS15.0软件进行分析，计量资料采用t检验， P＜0.05为有统计学意义。

　　2结果

　　2.1  两组MCF-7细胞中Sprouty2蛋白表达阳性细胞数

　　将两组MCF-7细胞中Sprouty2蛋白表达阳性细胞数进行比较，结果见表1

　　表1两组MCF-7细胞中Sprouty2蛋白表达阳性细胞数（x±s）

　　分组免疫细胞百分数（%）免疫细胞平均荧光强度

　　实验组31.1±0.63.20±0.13

　　对照组36.9±1.43.22±0.07

　　从表1可以看出，以流式细胞免疫荧光法发现，实验组MCF-7细胞中的Sprouty2蛋白阳性细胞百分数为（31.1±0.6）%，对照组为（36.9±1.4）%，明显低于对照组，且实验组中免疫细胞荧光强度明显弱于对照组，P均＜0.05，均具有统计学意义。

　　3讨论

　　乳腺癌成为当今危害女性健康的主要肿瘤之一，发病率增高，但是大量患者出现多药耐药性而导致化疗失败，且复发率较高。有研究报道，Sprouty2蛋白在多种肿瘤组织中的表达降低，引起组织生长发育失调、细胞异常增生，最终导致肿瘤的发生[2]。

　　本次实验结果显示，在人乳腺癌MCF-7细胞中Sprouty2蛋白表达下降，低于正常对照组，这是因为Sprouty2蛋白是一种具有抑癌作用的蛋白，在正常的乳腺组织中，表达较高，Sprouty2蛋白可通过对RTK等信号通路的抑制，防止细胞增生过度，阻止新生血管形成，维持乳腺组织的正常形态和生长发育。因此在乳腺的生长发育过程中担任着塑形平衡者和监视者的角色，防治乳腺癌的发生及发展。但是在乳腺癌细胞中，当Sprouty2蛋白表达失调，如Sprouty2蛋白表达的降低或缺失时，一方面显著增加细胞的周期活力，使得多种生长因子的反应过度，细胞分裂加速，从而导致细胞的过度增殖。另一方面，上述信号通路失去正常抑制，RTK等信号通路发生过度激活，引起细胞的无限制增生，并且向周围组织延伸扩散，最终促进肿瘤的发生。

　　综上所述，Sprouty2蛋白的低表达与乳腺癌的发生与发展有关。但Sprouty2蛋白表达的失调与乳腺癌发生的确切发病机制有待进一步研究。

　　参考文献：

　　[1] 秦超，董慧，杨健，等。Sprouty2蛋白表达对肾癌细胞功能影响的实验研究[J].现代泌尿外科杂志，2012,17（3）：268-271.

　　[2] 赵丽华，何谦，张淑群，等。prohibitin在乳腺癌MCF-7细胞表达抑制的鉴定[J].现代检验医学杂志，2011,26（6）：17-20.